動(dòng)態(tài)濁度法定量檢測清開(kāi)靈注射液中細菌內毒素

來(lái)源：http://thesierramadre.com/ 作者：余氯檢測儀 時(shí)間：2019-01-04

　　[摘要] 目的：建立定量檢測清開(kāi)靈注射液中細菌內毒素的方法。方法：采用《中國藥典》2005年版二部附錄中的動(dòng)態(tài)濁度法檢測細菌內毒素。結果：用此法檢測時(shí)無(wú)干擾因素影響，內毒素回收率為50%~200%。結論：使用動(dòng)態(tài)濁度法定量檢測清開(kāi)靈注射液中細菌內毒素是可行的，此方法既可避免兔熱原檢查法操作復雜的缺點(diǎn)，同時(shí)又避免了限量法檢測內毒素時(shí)的干擾。

　　[關(guān)鍵詞] 清開(kāi)靈注射液;細菌內毒素;動(dòng)態(tài)濁度法;干擾試驗

　　[中圖分類(lèi)號]R927.12 [文獻標識碼]B [文章編號]1673-7210(2009)03(a)-057-02

　　清開(kāi)靈注射液為中藥注射劑，是安宮牛黃丸的改型制劑。臨床上用于治療熱病神昏、中風(fēng)偏癱、意識不清，也可用于急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高熱以及腦血栓形成、腦出血見(jiàn)上述癥狀者，其臨床應用廣泛、用量大，又為中藥制劑，因而對其進(jìn)行熱原控制具有重要意義。因細菌內毒素限值檢查具有較大的干擾性，而選用動(dòng)態(tài)濁度法測定細菌內毒素可消除干擾，結果準確、可靠。該品種部頒規定的檢查項是熱原檢查，本法參照《中國藥典》2005版二部附錄中細菌內毒素的檢查法，對清開(kāi)靈注射液中細菌內毒素檢查法的可行性進(jìn)行探索，旨在建立一種快速檢測該注射液的方法，并對其進(jìn)行添加內毒素回收試驗及熱原檢查對比試驗，來(lái)證實(shí)此法的可行性。

　　1儀器與試藥

　　BET-32C細菌內毒素測定儀(天津大學(xué)無(wú)線(xiàn)電廠(chǎng));清開(kāi)靈注射液(批號20070204、20070607、20070512，河北神威藥業(yè)有限公司);TAL試劑(批號20070206，λ為0.03 EU/ml，規格0.5 ml/Amp，湛江海洋生物制品檢定廠(chǎng));細菌內毒素標準品(批號2007-7，120 EU/Amp，中國藥品生物制品檢定所);細菌內毒素檢查用水(批號20061208，規格10 ml/Amp，湛江海洋生物制品檢定廠(chǎng))。

　　2方法與結果

　　2.1 細菌內毒素限值的確定

　　公式為L(cháng)=K/M，K為規定的給藥途徑，即人均每千克體重每小時(shí)可接受的最大內毒素劑量，注射劑規格為5.0 EU/kg;M為1 h每千克體重的最大給藥劑量，為10 ml/kg，清開(kāi)靈注射液的人均最大給藥量為40 ml。中國人的體重按60 kg計，計算得樣品的內毒素限值L為7.5 EU/ml。

　　2.2 標準曲線(xiàn)的制備

　　用細菌內毒素檢查用水將內毒素標準品稀釋240～1 200倍，最終得細菌內毒素濃度為0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 3 EU/ml的系列稀釋溶液;各取0.1 ml分別加入預先加有0.1 ml TAL試劑的反應管內，混合均勻，立即插入BET-32C細菌內毒素測定儀內進(jìn)行自動(dòng)檢測，其中每一個(gè)濃度重復3管。結果見(jiàn)表1。

　　得回歸方程lgT=3.112-0.320 2lgC，其中相關(guān)系數r=-0.998 6，最低濃度λ1=0.031 3 EU/ml，空白對照管在檢測時(shí)間外，故標準曲線(xiàn)成立。

　　表 1 標準曲線(xiàn)的相關(guān)信息

　　2.3干擾試驗

　　2.3.1 樣品稀釋倍數的計算公式為MVD=(L?C)/λ1。L為清開(kāi)靈注射液內毒素限值，C為1.0 ml/ml，λ1為標準曲線(xiàn)的最低內毒素濃度0.031 3 EU/ml，計算得清開(kāi)靈注射液最大有效稀釋倍數MVD為240倍。

　　2.3.2 樣品溶液的配制及干擾試驗將清開(kāi)靈注射液用內毒素檢查用水依次稀釋為30、60、120、240倍的溶液，記為A1液;同時(shí)，另取4管，進(jìn)行相同倍數稀釋?zhuān)谙♂屢褐刑砑訚舛葹镸(4λ1)的細菌內毒素標準溶液，作為樣品添加內毒素陽(yáng)性對照管，記為B1液;分別取上述各液0.1 ml，加入預先加有0.10 ml TAL試劑的反應管內，混勻立即插入BET-32C細菌內毒素測定儀內進(jìn)行檢測，其中每一個(gè)濃度重復3管，計算回收率?；厥章?%)=(B1液內毒素值-A1液內毒素值)/M×100%。結果見(jiàn)表2。

　　樣品添加內毒素的平均回收率均在50%~200%范圍內，符合《中國藥典》2005年版有關(guān)規定，表明樣品的4個(gè)不同濃度溶液對TAL無(wú)干擾。

　　表 2 清開(kāi)靈注射液的干擾試驗

　　2.4 樣品溶液的回收率試驗

　　分別取3批清開(kāi)靈注射液，用細菌內毒素檢查用水制成4倍稀釋液，記為A2液;同時(shí)，另取4管進(jìn)行4倍稀釋?zhuān)⒃谙♂屢褐刑砑訚舛葹镸(4λ1)的細菌內毒素標準溶液，記為B2液;分別取上述各液0.1 ml，加入預先加有0.10 ml TAL試劑的反應管內進(jìn)行檢測，其中，每一個(gè)濃度重復3管，計算回收率。結果見(jiàn)表3。

　　3批清開(kāi)靈注射液的回收率均在50%~200%范圍內，表明清開(kāi)靈注射液在本實(shí)驗條件下對TAL試劑無(wú)干擾影響，因此日常檢驗選用240倍即可。

　　表 3 清開(kāi)靈注射液的回收率試驗

　　同時(shí)，進(jìn)行3批供試品的家兔熱原檢查對比試驗，結果一致，均為陰性。

　　3討論

　　從清開(kāi)靈注射液的干擾試驗結果可知，用細菌內毒素動(dòng)態(tài)濁度法檢測時(shí)，由于內毒素回收率在50%~200%范圍內，表明不存在干擾因素的影響，且3批清開(kāi)靈注射液的內毒素含量均在規定限度7.5 EU/ml以下。

　　用傳統的家兔法檢測細菌內毒素，由于操作復雜、影響因素多，對試驗結果影響很大;動(dòng)態(tài)濁度法具有操作簡(jiǎn)便、結果準確、檢測靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，避免了由于家兔及人為主觀(guān)判斷差異所導致的假陽(yáng)性或假陰性結果。經(jīng)過(guò)對比試驗，樣品的細菌內毒素定量檢測結果與家兔熱原檢測結果一致，說(shuō)明使用細菌內毒素動(dòng)態(tài)濁度法測定清開(kāi)靈注射液中細菌內毒素是可行的。

　　[參考文獻]

　　[1]國家藥典委員會(huì ).中國藥典[S].二部(附錄XI E).北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.85.

　　[2]EP Supplement[S].2000,41.

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