雙光徑濁度儀在疫苗細菌濃度檢測上的應用

來(lái)源：http://thesierramadre.com/ 作者：余氯檢測儀 時(shí)間：2020-12-27

　　1977年美國許可了14價(jià)肺炎球菌多糖疫苗和4價(jià)流腦疫苗后，這些莢膜多糖的檢測標準均為依靠物化和血清學(xué)的分析方法分析大量粉劑。隨后又發(fā)展了一種免疫電泳的方法用來(lái)測定肺炎成品疫苗中的多糖含量。微生物實(shí)驗室細菌濁度儀

　　經(jīng)試驗發(fā)現速率比濁儀(LSR nephelomety)除了被用于分析抗原抗體之間的動(dòng)態(tài)反應來(lái)檢測蛋白濃度外，還可用來(lái)定量測定多糖。

　　在23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗成品質(zhì)控項目中，23型肺炎球菌多糖定量是疫苗的重要檢測項目之一。速率散射濁度法(LSR)則是測定各型肺炎多糖含量的主要方法。因為利用了抗原抗體的特異性反應，所以可以準確地檢測23價(jià)肺炎多糖疫苗中各型多糖的含量。不同于普通化學(xué)檢測方法無(wú)法準確區分各型肺炎球菌多糖，該方法更為精確，并有較高的靈敏度。豐臨科技的雙光徑免疫濁度分析儀的工作原理就是基于速率散射濁度法。為此，我們對用IMMAGE測定8型肺炎球菌莢膜多糖進(jìn)行了系統的評估，并討論其檢測實(shí)用性。

　　1材料與方法

　　1. 1肺炎球菌多糖

　　8、19F、5、17F、33F、10A六個(gè)型別的肺炎球菌精制多糖。1.2血清

　　8型肺炎血清來(lái)源于丹麥國立血清研究所。

　　1.3相對標準品

　　各項生化檢測指標均合格的肺炎精制多糖，經(jīng)凍干衡重，精確標定后，保存備用。

　　1.4儀器

　　貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的雙光徑免疫濁度分析儀(IMMAGE)，UDR試劑盒以及配套的緩沖液buffer 1、稀釋液dilution 1，由貝克曼庫爾特公司提供。

　　1.5方法

　　先將相對標準品放入IMMAGE的樣品盤(pán)中，將血清倒入試劑盒放入試劑盤(pán)中，進(jìn)入IMMAGE的用戶(hù)自定義試劑(UDR)系統，使用自建的用戶(hù)自定義檢測項目，進(jìn)行定標，建立標準曲線(xiàn)。然后將檢測樣品放入樣品盤(pán)中，用自定義檢測項目測定樣品。儀器可通過(guò)多點(diǎn)定標曲線(xiàn)自動(dòng)計算樣本中的多糖含量。

　　1.6統計學(xué)處理

　　采用Microsoft Excel 2003和SPSS統計軟件處理檢測數據。測定結果以x±s表示，兩樣本均數用t檢驗。

　　2結果

　　2.1重復性測定

　　用8型肺炎球菌血清分別測定標示量分別為2.0、1.5、1.0的A、B、C3個(gè)8型肺炎多糖樣品各10次，結果見(jiàn)表1。

　　2.2回收率測定

　　用8型肺炎球菌血清重復測定8型肺炎多糖樣品10次,回收率為(99.25±0.02)%(表2)。

　　2.3靈敏度

　　用零濃度的空白液連續檢測10次。測定結果為(0.120±0.016)μg/mL,計算分析靈敏度為0.2 μg/mL(表3)。

　　2.4稀釋實(shí)驗

　　將樣品分別稀釋15、20、30、40倍，重復檢測3次，回收率為96.40% ～ 104.35%，平均值為99.82% ?；貧w方程為:Y=28.759X + 0.0369，r = 0.998(表4)。

　　2.5標準曲線(xiàn)的穩定性

　　用相對標準品配制3個(gè)濃度的標準校準物，將標準校準物作為樣品檢測，每天測定1次，每次雙份測定，連續5 d。經(jīng)t檢驗，校準物的測定結果與定值比較,差異無(wú)統計學(xué)意義(P>0.05)，標準曲線(xiàn)至少可穩定5 d。

　　2.6干擾實(shí)驗

　　采用配對差異試驗法，建立8型肺炎球菌多糖樣品對照組和加入3個(gè)濃度的干擾物的試驗組，每組樣品同時(shí)測定3次。計算干擾百分率(P)。干擾物為8、19F、5、17F、33F、10A六個(gè)血清型的肺炎球菌多糖。檢測結果干擾百分率(P)為1.35%～2.37%，配對t檢驗分析加入干擾物前后的肺炎8型多糖測定結果表明，8型肺炎球菌多糖樣品中加入8、19F、5、17F、33F、10A六個(gè)型別的肺炎多糖及濃度對IMMAGE測定8型肺炎球菌多糖無(wú)明顯干擾(P>0.05)。

　　3討論

　　23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗含有1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F共23個(gè)血清型的肺炎球菌多糖。疫苗中各型肺炎多糖含量是一個(gè)重要的質(zhì)量指標。目前速率散射濁度法(LSR)是定量測定多價(jià)肺炎球菌多糖疫苗的重要方法之一。該方法是建立在免疫反應聚合物形成速率的基礎上，同時(shí)由于抗原抗體反應的特異性，LSR法能夠區分并準確測定出23價(jià)肺炎多糖疫苗中各個(gè)血清型的多糖含量。起初該方法是被廣泛用于研究蛋白抗原與它的特異性抗體的反應[1]，用在檢測多糖抗原抗體反應方面不多。

　　雙光徑免疫濁度分析儀(IMMAGE)由于采用了近紅外波長(cháng)檢測手段和顆粒包被技術(shù)使其檢測精密度大大提高。并且IMMAGE的用戶(hù)自定義試劑(UDR)系統方便了用戶(hù)建立自定義檢測項目，用戶(hù)可以根據實(shí)際工作需要自行編輯反應參數，如樣品、試劑的用量、反應時(shí)間、反應類(lèi)型等。在用戶(hù)對自定義項目定標完成后，該系統可以根據用戶(hù)的選擇自動(dòng)計算標準曲線(xiàn),顯示相關(guān)參數，用戶(hù)可以節約自己換算的時(shí)間。并且，電腦會(huì )自動(dòng)存儲標準曲線(xiàn)的數據，在檢測樣品時(shí)自動(dòng)計算結果。IMMAGE采用封閉式自動(dòng)化檢測系統，其加樣、稀釋、反應、洗滌和分析等快速全自動(dòng)化，在15min內可獲得測定結果，可作為多價(jià)肺炎多糖疫苗定量測定手段。本文結果表明，IMMAGE測定8型肺炎球菌多糖具有較好的精密度、重復性，CV均小于5%，測定樣品時(shí)有較好的回收率，回收率為(99.25±0.02)%。分析靈敏度為0.2 μg/mL。此法有較好的稀釋線(xiàn)性，平均回收率為99.82%。標準曲線(xiàn)至少可以穩定5 d。加入19F、5、17F、33F、10A五個(gè)型別的肺炎球菌多糖(含量<100 μg/mL)對檢測無(wú)顯著(zhù)性干擾。初步的研究結果證明，采用IMMAGE定量測定23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗樣品中8型肺炎多糖含量是準確、可靠的，有較高的靈敏度和精密度，并且快捷、高效。

　　4參考文獻

　　[1]Chi-Jen lee. The Quantitatative Immunochemical Determination of Pneumococca Capsular Polysaccharide by Light scatlering Quantitative Rate Nephelornetry of Biol[J]. Stand,1983，11:55-64.

細菌濁度儀WGZ-XT_麥氏濁度儀

——本文由豐臨科技整理發(fā)布，內容供參考，如有侵權，請聯(lián)系刪除，謝謝！上海豐臨科技有限公司為你提供濁度儀(濁度計)、在線(xiàn)濁度儀、余氯儀、余氯分析儀、工業(yè)在線(xiàn)pH計、cod測定儀、pH計等多種水質(zhì)檢測儀，水質(zhì)分析儀，歡迎您前來(lái)選購，豐臨科技竭誠為您服務(wù)！